端粒酶活性检测

一、服务简介

      端粒酶（Telomerase）是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶。人端粒酶RNA组分(hTR)于1995年被克隆，其中含有端粒重复序列的模板（5’-CUAACCCUAAC-3’）；蛋白质组分具有RNA依赖的DNA多聚酶活性。端粒酶能以自身RNA为模板复制合成端粒序列，端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列，这一序列在生物进化中具有高度的保守型（-TTAGGG-),端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害变异（染色体末端融合、重排、移位和缺失等）起重要作用）。端粒酶的功能包括添加端粒重复序列，端粒长度的稳定和维持，以及染色体的整体空间取向、结构完整性和稳定性。

     在胚性细胞等增殖活跃的细胞中具有端粒酶活性，而在正常成熟体细胞中端粒酶失活，同时还发现绝大多数永生性细胞株和肿瘤细胞株都呈端粒酶阳性，而在癌旁组织和正常组织中阳性率则很低，推测端粒酶可能是一个广泛的肿瘤标志物，端粒酶反应超越了细胞的增殖限制，这可能是恶性肿瘤发生的一个先决条件。

      传统的端粒酶研究方法是以探针延伸为基础测定端粒酶活性，需要大量的样品材料，且检验灵敏度受限，直到1994 年kim等采用端粒重复扩增法（Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP）所取代。标准的TRAP法检测是通过PCR扩增端粒酶反应的产物，使用放射性标记，经凝胶电泳后，通过放射自显影显示检测结果。该方法相较于传统的方法，检测灵敏度有所提升，然而在检测环节仍然操作繁琐，且结果判读存在主观性。

      我公司采用的CELL STR ID®端粒酶TRAP+CE检测方法，提升了检测效率（全流程：4-6h），结果判读更加自动化和标准化，且检测灵敏度也有大幅度地提升。

二、服务内容

（一）服务流程

（二）服务特点

      1．取适量蛋白提取物，参照TRAP 法，对端粒酶底物进行扩增，扩增产物在ABI 3130XL 型遗传分析仪上进行毛细管电泳检测和分析。

      2．极高的灵敏度。检测线为皮克级：30pg/μL。

      3．鉴定报告中文版，以及图谱（见端粒酶检测图谱）。

（三）注意事项

      1．样品寄送：细胞数量≥10⁶个，1.5ml离心管；干冰运输。

      2．正常检测周期5-7个工作日。

（四）结果交付

      检测结果以电子版的形式发放到订单或合同上面预留的邮箱，书面报告可根据需要随时提供，寄送到贵单位。

三、检测端粒酶活性的常用方法：

      1、直接检测端粒酶（蛋白及RNA的结合复合物）的活性，检测它是否可以延伸RNA模板，然后跑胶或者探针杂交，检测端粒cDNA延伸的长度，以此来判断端粒酶的活性高低。（TRAP法）

      不足：经典方法，但该方法需要放射性同位素标记及制胶；重复性差、周期长、主观判读等。

      2、间接检测端粒酶组分（催化亚基的mRNA量）的表达量。

      不足：本质是检测端粒酶的一个组分蛋白TERT的mRNA的表达量, 但是在多数细胞中，端粒酶催化亚基的表达很难检测到,且mRNA的表达量并不一定能准确反映端粒酶的活性强度，因端粒酶是一种由RNA及多种蛋白组成的复合物，TERT酶只是其中较为主要的一种蛋白。

四、北京美德华生端粒酶检测（TRAP+CE）流程：

      1 样本处理：端粒酶提取试剂盒，按照操作说明书，取适量细胞提取蛋白。-80°保存待用。   

      2 端粒扩增：端粒酶扩增试剂盒，按照操作说明，扩增端粒重复序列。

      3 端粒序列检测：毛细管电泳检测，按照操作说明进行检测。

      4 端粒扩增产物结果分析： 按照SOP进行数据分析。

      5 报告整理：

五、相关文献：

      1. Telomeres and telomerase: three decades of progress  JW Shay, WE Wright - Nature Reviews Genetics, 2019 - nature.com

      2. Alternative lengthening of telomeres: Models, mechanisms and implications. Nat Rev Genet. 11:319–330. 2010. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI

      3. Telomerase activity concentrates in the mitotically active segments of human hair follicles. J Invest Dermatol. 108:113–117. 1997. View Article : Google Scholar : PubMed/NCBI

      4. Detection of telomerase activity in human cells and tumors by a telomeric repeat amplification protocol (TRAP)  Methods in Cell Science 17: 1-15, 1995