仓鼠细胞的STR(短串联重复序列)鉴定主要用于确认细胞系的身份和检测是否存在交叉污染。以下是仓鼠细胞STR鉴定的关键步骤和方法:
1. STR鉴定的适用性
目前,STR鉴定主要适用于人源和小鼠细胞系,技术相对成熟,并有完善的数据库支持。
仓鼠细胞,仓鼠11个STR基因座位点,可区分CHO,CHO-K1,CHL,CHK,V79等不同中国仓鼠细胞的STR鉴定(自研数据库)。
2. 种属鉴定替代方案
由于仓鼠细胞STR数据库不完善,可采用线粒体COI基因种属鉴定来确认细胞来源及检测种间交叉污染:
方法:提取细胞DNA,使用种属特异性引物扩增线粒体COI基因,通过电泳分析片段大小:
中国仓鼠:315 bp
人类:391 bp
小鼠:150 bp
大鼠:196 bp
猴类:222-287 bp9。
3. STR鉴定的尝试(如适用)
如果实验室或供应商提供仓鼠STR检测服务,可参考以下流程:
样本准备:收集细胞(T25培养瓶足够)或提取DNA。
检测机构:选择专业机构进行STR分型。
数据分析:若数据库中有参考STR数据(如某些CHO细胞系),可进行匹配度分析(≥80%视为同源)。
4. 质量控制建议
交叉污染检测:即使无法STR比对,仍需排查人源或其他物种污染(如人源STR位点检测)。
细胞来源验证:从ATCC、ECACC等权威库引种,并要求提供COA(分析证书)和STR报告(如适用)。
5. 替代鉴定方法
染色体核型分析:确认仓鼠细胞的特异性染色体模式。
同工酶电泳:如LDH(乳酸脱氢酶)同工酶谱分析。
基因测序:关键基因(如β-actin、GAPDH)测序比对。
总结。
尽管目前仓鼠细胞STR鉴定仍面临技术限制,一些公司采用COI基因种属鉴定结合其他方法(如核型分析)进行身份验证。但是,美德华生借对细胞STR鉴定的多年积累,结合对中国仓鼠细胞的生信和验证分析,历经多年筛选出可以区分CHO,CHO-K1,CHL,CHK,V79等不同中国仓鼠细胞的STR鉴定体系,已经可以提供仓鼠STR鉴定服务。
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