STR图谱-拉起峰形成的原因?

STR（短串联重复序列）图谱中出现“拉起峰”（Pull-up peaks），通常是由于电泳或荧光检测过程中的信号干扰导致的。以下是其形成的主要原因及解释：

1. 荧光光谱重叠（Spectral Overlap）

原因：STR检测通常使用多重荧光标记，不同荧光染料发射的波长可能存在部分重叠。即使使用滤光片分离信号，高强度的荧光峰可能“渗漏”到其他检测通道（如蓝色通道的信号被绿色通道误检）。

表现：在非目标通道中出现与主峰位置相同的低强度峰（镜像峰），且高度与主峰强度相关。

2. 信号过载（Signal Saturation）

原因：当STR扩增产物量过高时，检测器的信号超出线性范围（如CCD相机或光电倍增管饱和），导致高强度的峰信号“溢出”到相邻通道。

表现：主峰顶部平缓（截断），同时在其它通道对称位置出现拉起峰。

3. 矩阵校准不当（Matrix Calibration Issue）

原因：荧光信号分光时需通过“荧光矩阵”（Color Matrix）校正不同通道的交叉干扰。若校准不准确或试剂/仪器状态变化（如激光强度波动），可能导致信号分配错误。

表现：拉起峰出现在特定通道组合中，可能伴随整体基线异常。

4. PCR或模板过量

原因：PCR扩增时模板DNA过量或循环数过多，导致产物浓度极高，加剧信号过载和荧光干扰。

表现：多个通道均可能出现拉起峰，且峰高与模板量正相关。

如何识别拉起峰？

拉起峰通常与主峰位置完全相同，但出现在其他荧光通道。

峰高度通常低于主峰（约为主峰的1/10~1/3），且形态对称。

通过调整荧光矩阵或降低进样量后，拉起峰会减弱或消失。

解决方法

降低检测信号强度：减少PCR产物上样量或稀释样本。

优化荧光矩阵：重新校准仪器，确保各通道信号分离。

使用特异性更高的荧光染料：如升级至5/6色荧光系统以减少光谱重叠。

数据分析时手动校正：在STR分型软件中标记并忽略拉起峰。

拉起峰是STR分析中的常见技术问题，通过优化实验条件和数据分析通常可有效规避。